Respuesta anticlases mayores de anticuerpos humanos séricos en antisueros hiperinmunes obtenidos en carneros / Characterization of hyperimmune anti-human serum produced in sheep

Introducción: La inmunoelectroforesis es una técnica de precipitación que permite la caracterización de muestras biológicas complejas. En el Departamento de Inmunología del Instituto de Ciencias Básicas y Preclínicas Victoria de Girón se cuenta con un antisuero hiperinmune obtenido por inmunizaciones de carneros contra proteínas totales séricas humanas y con otro antisuero anti IgA de calostro humano. Objetivo: Identificar IgG, IgM e IgA en suero humano y determinar respuesta anti IgM humana en el antisuero anti IgA de calostro humano obtenido en carnero. Material y Métodos: Se realizó un estudio observacional, descriptivo y transversal desde noviembre de 2017 hasta junio de 2018. Se desarrolló una inmunoelectroforesis de suero humano normal empleando el antisuero hiperinmune. Resultados: Se identificaron IgG, IgM e IgA además de albúmina y otras fracciones proteicas y se determinó respuesta anti IgM humana en el antisuero anti IgA de calostro humano obtenido en carnero. Conclusiones: Este trabajo permitió identificar y determinar la respuesta anticlases mayores de inmunoglobulinas en la muestra de estudio(AU)

Introduction: Immunoelectrophoresis is a precipitation technique that allows the characterization of complex biological samples. The Immunology Department of the Institute of Basic and Pre-Clinical Sciences Victoria de Girón has a hyperimmune antiserum obtained by immunization of sheep against human serum total proteins and it also has an anti-human IgA antiserum obtained from human colostrum. Objective: The aim of this study was to identify IgG, IgM and IgA in human serum and to determine response to anti-human IgM in human colostral IgA with antiserum obtained in sheep. Material and Methods: An observational descriptive cross-sectional study was conducted from November 2017 to June 2018. Immunoelectrophoresis of normal human serum was performed using hyperimmune antiserum. Results: These procedures allowed to identify IgG, IgM and IgA in addition to albumin and other protein fractions and to determine response to anti-human IgM in human colostral IgA with antiserum obtained in sheep. Conclusions: This work allowed us to identify and determine significant anti-class responses of immunoglobulins in the sample studied(AU)

Proteína C reactiva y marcadores de estrés oxidativo como predictores de la corioamnionitis histológica y el parto pretérmino / CRP and oxidative stress markers as predictors of histological chorioamnionitis and preterm birth

Introducción: la determinación de biomarcadores que permitan el diagnóstico precoz de la corioamnionitis histológica y el parto pretérmino constituye un tema de interés debido a las complicaciones para la salud del recién nacido y la repercusión social que acarrean estas dos entidades. A pesar de los múltiples estudios llevados a cabo aún no se cuentan con biomarcadores que permitan la predicción de forma efectiva de ambas entidades. Objetivo: en la actual revisión bibliográfica se pretendió abordar la posible relación y uso en el diagnóstico de dos biomarcadores del suero materno: la proteína C reactiva y los marcadores de estrés oxidativo, con respecto a la corioamnionitis histológica y el parto pretérmino. Métodos: se realizó una búsqueda en las bases de datos Pubmed, SciELO, Hinari y Lilacs en relación con el tema. Resultados: a pesar que la proteína C reactiva en suero materno es empleada de forma rutinaria como un marcador en el seguimiento de la corioamnionitis clínica, en la literatura consultada existen estudios a favor y en contra con respecto al diagnóstico de la corioamnionitis histológica y al parto pretérmino y aunque son escasos los estudios en suero materno, se ha establecido una relación estrecha entre los marcadores de estrés oxidativo y la inflamación, siendo ambos causantes de ambas entidades. Conclusiones: se recomiendan las determinaciones cuantitativas seriadas y el uso de la proteína C reactiva de alta sensibilidad en el seguimiento de estas patologías. Son pocos los estudios acerca del valor predictivo de los marcadores de estrés oxidativo para ellas.

Introduction: biomarkers determination allowing the early diagnose of histological chorioamnionitis and preterm birth is a scientific interest due to the complications for the newborn health and social repercussion that this two entities brings along. Despite the multiples studies carried out about this issue, there are not biomarker which can efficiently predict both pathologies yet. Objectives: the current literature review was intended to address the possible relationship and use in diagnosing of two maternal serum biomarkers: C-reactive protein and oxidative stress markers, with regard to histological chorioamnionitis and preterm delivery. Methods: a search was made in Pubmed, Hinari, Scielo and Lilac's data bases. Results: although C-reactive protein in maternal serum is routinely used as a marker in monitoring clinical chorioamnionitis in the literature, there are studies favoring and against the diagnosis of histological chorioamnionitis and childbirth preterm and although there are few studies on maternal serum, a close relationship has established between inflammation and oxidative stress markers, both are cause these entities. Conclusions: the serial quantitative determinations and the use of high sensitivity CRP are recommended in monitoring these pathologies. There are few studies on the predictive value of oxidative stress markers for them.

Relación de las citoquinas proinflamatorias con la corioamnionitis subclínica y el parto pretérmino / Pro-inflammatory cytokines related to the subclinical chorioamnionitis and the preterm labor

El parto pretérmino es uno de los principales problemas de la obstetricia contemporánea pues representa una complicación obstétrica frecuente del embarazo y constituye una importante causa de muerte perinatal y de secuela a largo plazo del sobreviviente. Se plantea que es multicausal, aunque las evidencias sostienen que la infección uterina es su causa más frecuente. Niveles elevados de interleuquinas 1, 6, 8 y factor de necrosis tumoral alfa han sido detectados en el líquido amniótico de gestantes con infección uterina y dinámica uterina de origen idiopático, lo que nos incitó a revisar la relación existente entre las citoquinas proinflamatorias y la corioamnionitis subclínica causante de parto pretérmino y analizar si estas pueden ser utilizadas con carácter diagnóstico en estas entidades. Para ello se llevó a cabo una revisión bibliográfica en bases de datos como Pubmed, Scielo, Lilacs e Hinari. Según la bibliografía consultada, las citoquinas proinflamatorias son las responsables del desencadenamiento tanto del parto a término como el pretérmino, considerablemente más aumentadas en este último por estar casi siempre asociado a infección subclínica, la interleuquina 6 en líquido amniótico es el mejor marcador de infección intra-amniótica, que tienen el parto pretérmino y la rotura prematura de membrana. Concluimos que la determinación de las citoquinas proinflamatorias en líquido amniótico y suero materno pudiera resultar de utilidad en el diagnóstico precoz de la corioamnionitis histológica y en la prevención del parto pretérmino(AU)

The preterm labor is one of the main problems of the current obstetrics since it represents a frequent obstetric complication of pregnancy and it is a leading cause of perinatal death and also of long term sequelae in the survivor. It is propose that it is multicausal; although evidences support that the uterine infection is the more frequent one. High levels of interleukins 1, 6, 8 and the tumor necrosis factor alpha have been detected in the amniotic fluid of pregnants with uterine infection and idiopathic uterine dynamics, the authors made a review of the relation between pro-inflammatory cytokines and the cause of preterm delivery subclinical chorioamnionitis and also, to analyze if these may be used with a diagnostic character in these entities. Thus a bibliographic review was conducted in databases like Pubmed, Scielo, Lilacs and Hinari. According to the consulted bibliography, the pro-inflammatory cytokines are responsible for the triggering of the term labor and the preterm labor as well considerably more increased in this last one due to being almost always in association with a subclinic infection, the interleukin 6 in amniotic fluid is the better marker of intra-amniotic infection related to the preterm labor and the premature rupture of membranes. We concluded that the determination of pro-inflammatory cytokines in amniotic fluid and mother serum could be useful in the early diagnosis of the histological chorioamnionitis and in the prevention of preterm labor(AU)

Relación de las citoquinas proinflamatorias con la corioamnionitis subclínica y el parto pretérmino / Pro-inflammatory cytokines related to the subclinical chorioamnionitis and the preterm labor

El parto pretérmino es uno de los principales problemas de la obstetricia contemporánea pues representa una complicación obstétrica frecuente del embarazo y constituye una importante causa de muerte perinatal y de secuela a largo plazo del sobreviviente. Se plantea que es multicausal, aunque las evidencias sostienen que la infección uterina es su causa más frecuente. Niveles elevados de interleuquinas 1, 6, 8 y factor de necrosis tumoral alfa han sido detectados en el líquido amniótico de gestantes con infección uterina y dinámica uterina de origen idiopático, lo que nos incitó a revisar la relación existente entre las citoquinas proinflamatorias y la corioamnionitis subclínica causante de parto pretérmino y analizar si estas pueden ser utilizadas con carácter diagnóstico en estas entidades. Para ello se llevó a cabo una revisión bibliográfica en bases de datos como Pubmed, Scielo, Lilacs e Hinari. Según la bibliografía consultada, las citoquinas proinflamatorias son las responsables del desencadenamiento tanto del parto a término como el pretérmino, considerablemente más aumentadas en este último por estar casi siempre asociado a infección subclínica, la interleuquina 6 en líquido amniótico es el mejor marcador de infección intra-amniótica, que tienen el parto pretérmino y la rotura prematura de membrana. Concluimos que la determinación de las citoquinas proinflamatorias en líquido amniótico y suero materno pudiera resultar de utilidad en el diagnóstico precoz de la corioamnionitis histológica y en la prevención del parto pretérmino

The preterm labor is one of the main problems of the current obstetrics since it represents a frequent obstetric complication of pregnancy and it is a leading cause of perinatal death and also of long term sequelae in the survivor. It is propose that it is multicausal; although evidences support that the uterine infection is the more frequent one. High levels of interleukins 1, 6, 8 and the tumor necrosis factor alpha have been detected in the amniotic fluid of pregnants with uterine infection and idiopathic uterine dynamics, the authors made a review of the relation between pro-inflammatory cytokines and the cause of preterm delivery subclinical chorioamnionitis and also, to analyze if these may be used with a diagnostic character in these entities. Thus a bibliographic review was conducted in databases like Pubmed, Scielo, Lilacs and Hinari. According to the consulted bibliography, the pro-inflammatory cytokines are responsible for the triggering of the term labor and the preterm labor as well considerably more increased in this last one due to being almost always in association with a subclinic infection, the interleukin 6 in amniotic fluid is the better marker of intra-amniotic infection related to the preterm labor and the premature rupture of membranes. We concluded that the determination of pro-inflammatory cytokines in amniotic fluid and mother serum could be useful in the early diagnosis of the histological chorioamnionitis and in the prevention of preterm labor

Determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena mediante ELISA utilizando como recubrimiento ADN xenógeno y alógeno / Determination of IgG antibodies to double-chain DNA by ELISA using the xenogenic and allogenic DNA as coat

El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un inmunoensayo enzimático indirecto, para la determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena, es de difícil obtención y muy costoso. Por tal motivo, el objetivo del presente trabajo es evaluar la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar estos anticuerpos. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico. Se obtuvo un 100por ciento de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los dos tipos de ADN. Según lo anterior se concluye que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de dicho antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera(AU)

Obtaining of the xenogenic DNA used as coat of a indirect enzymoimmunoassay, to determine IgG antibodies to double-chain DNA is difficult, and also it is very expensive. Thus, aim of this paper is to valuate usefulness of allogenic DNA as coat antigen to detect these antibodies. As coat we used DNA from calf thymus, and DNA from 6 subjects supposedly healthy. Analysis of presence of antibodies war carried out in sera from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. There was a 100 percent of coincidence in results, as well as a few differences in discrimination ability of method using the two types of DNA. According above mentioned, we conclude that human DNA is useful as coat of this enzymoimmunoassay. Achievement of such antigen is less expensive than that of DNA from calf thymus(AU)

Determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena mediante ELISA utilizando como recubrimiento ADN xenógeno y alógeno / Determination of IgG antibodies to double-chain DNA by ELISA using the xenogenic and allogenic DNA as coat

El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un inmunoensayo enzimático indirecto, para la determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena, es de difícil obtención y muy costoso. Por tal motivo, el objetivo del presente trabajo es evaluar la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar estos anticuerpos. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico. Se obtuvo un 100por ciento de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los dos tipos de ADN. Según lo anterior se concluye que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de dicho antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera.

Obtaining of the xenogenic DNA used as coat of a indirect enzymoimmunoassay, to determine IgG antibodies to double-chain DNA is difficult, and also it is very expensive. Thus, aim of this paper is to valuate usefulness of allogenic DNA as coat antigen to detect these antibodies. As coat we used DNA from calf thymus, and DNA from 6 subjects supposedly healthy. Analysis of presence of antibodies war carried out in sera from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. There was a 100 percent of coincidence in results, as well as a few differences in discrimination ability of method using the two types of DNA. According above mentioned, we conclude that human DNA is useful as coat of this enzymoimmunoassay. Achievement of such antigen is less expensive than that of DNA from calf thymus.

Determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena mediante ELISA utilizando como recubrimiento ADN xenógeno y alógeno / Determination of IgG antibodies versus dsDNA by ELISA using xenogenous and halogenous DNA coating

Se evaluó la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar los anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena. El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un enzimoinmunoensayo indirecto, para la determinación de estos anticuerpos, es de difícil obtención y muy costoso. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de lupus eritematoso sistémico. Se obtuvo 100 por ciento de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los 2 tipos de ADN. Según lo anterior se concluyó que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de este antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera(AU)

The usefulness of allogenous DNA as a coating antigen to detect IgG antibodies versus dsDNA was evaluated. The xenogenous DNA used as a coating of an indirect immunoenzimatic assay for determining these antibodies is difficult to obtain and very expensive. Calf thymus DNA and DNA from 6 apparently sound subjects was utilized for coating. The analysis of the presence of antibodies was made in serum from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. 100 percent of coincidence was obtained in the results. A few differences in the discrimination capacity of the method with the use of two DNA types were observed. According to the above, it was concluded that human DNA is useful as a coating of this enzymoimmunoassay. The obtention of such antigen cost less than that of the calf thymus(AU)

Determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena mediante ELISA utilizando como recubrimiento ADN xenógeno y alógeno / Determination of IgG antibodies versus dsDNA by ELISA using xenogenous and halogenous DNA coating

Se evaluó la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar los anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena. El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un enzimoinmunoensayo indirecto, para la determinación de estos anticuerpos, es de difícil obtención y muy costoso. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de lupus eritematoso sistémico. Se obtuvo 100 por ciento de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los 2 tipos de ADN. Según lo anterior se concluyó que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de este antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera.

The usefulness of allogenous DNA as a coating antigen to detect IgG antibodies versus dsDNA was evaluated. The xenogenous DNA used as a coating of an indirect immunoenzimatic assay for determining these antibodies is difficult to obtain and very expensive. Calf thymus DNA and DNA from 6 apparently sound subjects was utilized for coating. The analysis of the presence of antibodies was made in serum from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. 100 percent of coincidence was obtained in the results. A few differences in the discrimination capacity of the method with the use of two DNA types were observed. According to the above, it was concluded that human DNA is useful as a coating of this enzymoimmunoassay. The obtention of such antigen cost less than that of the calf thymus.

Propuesta de la actividad enzimática como procedimiento analítico rector en la evaluación de conjugados / Proposal of the enzymatic activity as a ruling analytical procedure in the evaluation of conjugates

Se propuso el empleo de la determinación de la actividad enzimática sin mediación de la interacción antígeno-anticuerpo, como procedimiento analítico inicial en la evaluación de conjugados inmunoenzimáticos. Los conjugados empleados en los métodos inmunoenzimáticos deben ser evaluados una vez obtenidos y cada cierto tiempo. Como en estos procedimientos la señal que se obtiene depende del producto enzimático formado, sería ventajoso iniciar la evaluación determinando la actividad de la enzima independientemente de la del producto como conjugado. Se sugirió un método basado en la adición del conjugado de manera directa al soporte empleado para el inmunoensayo enzimático y seguidamente el sustrato de la enzima. Se incluyó la forma de interpretar los resultados y se concluyó que este es un proceder sencillo, que pudiera tener un papel rector en la evaluación de estos reactivos(AU)

Propuesta de la actividad enzimática como procedimiento analítico rector en la evaluación de conjugados / Proposal of the enzymatic activity as a ruling analytical procedure in the evaluation of conjugates

Se propuso el empleo de la determinación de la actividad enzimática sin mediación de la interacción antígeno-anticuerpo, como procedimiento analítico inicial en la evaluación de conjugados inmunoenzimáticos. Los conjugados empleados en los métodos inmunoenzimáticos deben ser evaluados una vez obtenidos y cada cierto tiempo. Como en estos procedimientos la señal que se obtiene depende del producto enzimático formado, sería ventajoso iniciar la evaluación determinando la actividad de la enzima independientemente de la del producto como conjugado. Se sugirió un método basado en la adición del conjugado de manera directa al soporte empleado para el inmunoensayo enzimático y seguidamente el sustrato de la enzima. Se incluyó la forma de interpretar los resultados y se concluyó que este es un proceder sencillo, que pudiera tener un papel rector en la evaluación de estos reactivos

Inmunogenicidad de la vacuna cubana recombinante heberbiovac HB en modelos experimentales y aplicados al humano

Uno de los pilares fundamentales en el control, la eliminación y posible erradicación de la hepatitis viral tipo B-D es la utilización de la vacuna de producción cubana contra la hepatitis B. Se desarrollaron modelos experimentales y aplicados al humano que permitieron el estudio de inmunogenicidad mediante distintas vías, dosis y esquemas. Se trabajó experimentalmente se trabajó con ratones BALB/c, con la aplicación de 1 mg/dosis por vía intramuscular (IM) e intraperitoneal (IP) en 3 esquemas diferentes 0-1-2, 0-1-4 y 0-4-8 semanas. La inmunogenicidad se estudió mediante la cuantificación del anticuerpo contra el antígeno de superficie (AgsHB), con la aplicación de un método inmunoenzimático. En todos los animales hubo seroconversión con los esquemas 0-1-4 y 0-4-8 semanas. En el esquema 0-1-2 la vía IP resultó más inmunogénica que la vía IM, produjeron 60 y 35 % de seroconversión, respectivamente. La vía IP tuvo un coeficiente de variación menor cuando se compararon los esquemas 0-1-4 y 0-4-8 semanas, de todas formas resultó alto para ser animales BALB/c. En humanos se inmunizaron estudiantes de medicina y enfermería con el empleo de 20 mg/dosis por vía IM y 2 mg/dosis vía intradérmica (ID), con los esquemas 0-1-4 y 0-4-8 semanas; se demostró que la seroprotección e hiperrespuesta era mayor en el esquema 0-4-8 independientemente de la vía utilizada y que el esquema 0-1-4 no produjo la inmunogenicidad requerida por lo que debe ser utilizado de manera excepcional. Se obtuvieron estándares de anticuerpos nacionales para la aplicación en métodos de cuantificación de anti-AgsHB, tanto en estudios experimentales como en humanos.

One of the fundamental pillars in the control, elimination and possible eradication of B-D viral hepatitis is the use of the Cuban-made hepatitis B vaccine. Experimental models as well as models for humans were developed to study immunogenicity using various routes of administration, doses and schedules. Balb/c mice were used on experimental basis to which 1 mg/dose were administered by intramuscular(IM) and intraperitoneal (IP) within three different vaccination schedules, i,e, at 0, 1, and 2 weeks; 0, 1 and 4 weeks, and 0, 4 and 8 weeks. Immunogenicity was stufied through quantification of antibodies to surface antigens by using an immunoenzymatic method. Seroconversion was present in all animals at 0, 1 and 4 and 0, 1, and 8 weeks schedule. However, in 0, 1 and 2 schedule, IP route of administration was more immunogenic than IM, with 60% and 35% seroconversion respectively. IP route had a lower variation coefficient than 0, 1 and 4 week and 0, 4 and 8 schedules were compared, but anyway, it was high even for Balb/c animals. Medical and nursing students were immunized with 20 mg/dose IM and 2mg/dose intradermally within 0, 1 and 4 week and 0,4 and 8 w schedules. It was showed that seroprotection and hyperesponse were greater in 0, 4 and 8 week vaccination schemes regardless of the route of administration and that 0, 1 and 4 w schedule does not bring required immunogenicity, therefore, it should be used exceptionally. National antibody standards were obtained to be applied in anti-HbsAg quantification methods both in experimental and human-based studies.